原代細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)：

貼壁細(xì)胞經(jīng)過(guò)快遞運(yùn)輸顛簸會(huì)出現(xiàn)漂浮脫落等情況： 收到先放培養(yǎng)箱靜置穩(wěn)定。如有脫落需收集處理，處理細(xì)節(jié)請(qǐng)查閱以下信息，原瓶?jī)?nèi)為完全培養(yǎng)基，可以收集使用。

收到細(xì)胞后請(qǐng)把細(xì)胞圖片狀態(tài)發(fā)我們， 根據(jù)圖片可以給出接下來(lái)的處理建議（傳代或者換液），首次建議一比二傳代至2個(gè)T25。

貼壁細(xì)胞傳代步驟：
準(zhǔn)備工作：胰酶和完全培養(yǎng)基（需要提前37度復(fù)溫）、PBS（常溫）避免細(xì)胞遇冷受刺激

（1） 吸出原培養(yǎng)液

（2） 加入2ml左右PBS，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞，吸出PBS丟棄

（3） 加入1ml左右0.25%含EDTA的胰酶，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞。

（4） 根據(jù)不同的細(xì)胞放入培養(yǎng)箱時(shí)及時(shí)關(guān)注消化時(shí)間，消化約2-3min，顯微鏡下看到細(xì)胞中間的細(xì)胞明顯分離變圓細(xì)胞間隙變大，顯微鏡下看細(xì)胞呈單個(gè)游離狀態(tài)，側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以滑落時(shí)可終止消化，可以輕拍培養(yǎng)瓶側(cè)身。（消化時(shí)主要看消化狀態(tài)，如果沒(méi)有變圓，側(cè)立時(shí)不能滑落時(shí)，可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間，每30s觀察一次細(xì)胞）

（5） 加入3ml含10%血清的培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)輕輕吹打（不要太用力）使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液。

（6） 收集細(xì)胞懸液離心，1000rpm/min（約250g）  5分鐘，離心完吸出上清丟棄。

（7） 加入新鮮完全培養(yǎng)基，吹打幾下混勻細(xì)胞即可，按需接種到新培養(yǎng)瓶，補(bǔ)足完全培養(yǎng)基，擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。

（8） 檢查培養(yǎng)箱二氧化碳，溫度和水盤。

貼壁細(xì)胞傳代的方法，特別注意的是第4步消化過(guò)程，消化至到細(xì)胞完全變圓以后側(cè)立培養(yǎng)瓶細(xì)胞可以出現(xiàn)滑落時(shí)再終止消化。消化到這樣的一個(gè)狀態(tài)，后續(xù)輕輕稍微吹一下即可很好的分散細(xì)胞。

后續(xù)處理建議：傳代后2-3天換液一次即可，（如細(xì)胞第二天全部貼壁培養(yǎng)基顏色變黃，可以換液，）無(wú)需每天換液（換液太勤可能會(huì)損失細(xì)胞影響細(xì)胞狀態(tài)）換液時(shí)候如果沒(méi)有特殊情況也可以不用PBS清洗。

原代懸浮細(xì)胞接收注意事項(xiàng):   

1. 懸浮細(xì)胞經(jīng)過(guò)快遞運(yùn)輸，會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞皺縮和死細(xì)胞碎片等情況，收到時(shí)先放培養(yǎng)箱靜置4小時(shí)以上，2.將瓶?jī)?nèi)全部培養(yǎng)基吸至離心管內(nèi)離心收集，3.使用5-6ml新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀后接種T25培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。

懸浮細(xì)胞傳代：
如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。                                        方法一：將細(xì)胞懸液收集到離心管中1000rpm，離心5min，棄去上清，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)液后重懸混勻按1：2的比例分到 新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力。                                                                                 方法二：1) 半換液處理，豎著培養(yǎng)瓶靜置 10-20min 左右，肉眼可見(jiàn)大部分細(xì)胞沉在底部；                                                                                                                              2) 輕輕吸掉 3ml 左右培養(yǎng)基，將剩余細(xì)胞懸起混勻；                                                   3) 將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8 mL 完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中或者培養(yǎng)瓶中，一般這樣傳代 3 次左右可以離心傳代一次。                                                                                            注意：使用試劑需要提前37度復(fù)溫，避免細(xì)胞遇冷受刺激皺縮。

后續(xù)處理建議：懸浮細(xì)胞狀態(tài)在無(wú)碎片無(wú)黑點(diǎn)的情況下無(wú)需換液，觀察培養(yǎng)基偏黃及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)液2ml左右，當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)分泌物可以使用半換液法處理，參考圖片

離心管方式收貨：收到離心管酒精消毒放入培養(yǎng)穩(wěn)定2-4H后進(jìn)行1000rpm離心5min。去除上清后保留細(xì)胞沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸混勻轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)，次日觀察細(xì)胞的狀態(tài)及密度.